Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型癌症患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出有现口内自身突变到经常出有现1改进型白血病药理学呕吐的方面率在成人时期就有很差的描绘出有，多个口内自身突变HIV的成人记事70%在血清转换后10将近患上白血病，而随访15年的成人这一人口比例增高到84%。相对来说，占有药理学1改进型白血病一半以上的改进型1改进型白血病的发作必要还不能受益充分的学拳法研究。

越来越多的人开始常用分期系统来定义1改进型白血病的方面：母形体在经常出有现多种口内自身突变时进入第1下一阶段，经常出有现血糖异常时进入第2下一阶段，经常出有现呕吐时进入第3下一阶段。一些多发口内自身突变HIV的母形体，在1期和2期，方面快速，并其发展为发作的1改进型白血病。我们在此之前描绘出有了一小组在首次监测到多种口内自身突变抽取后数10年无白血病的极慢方面者，这小组病患者次数少，但特质非常明确。随后，我们发现口内自身免疫特异性CD8+T支线粒形体反理应在方面平稳的病患者在此之前整形体不近十年存在，但在近期发作和近十年近十年存在的白血病病患者在此之前很不易监测到。这意味著说明，与方面病患者相比之下，这些病患者自身免疫反理应的闭环增强。

后期学拳法研究说明，尽管闭环性T支线粒形体(Treg)数量长小时，但白血病病患者近十年存在一些功用毛病，其在此之前以外对IL-2的反理应灵活命性减低。此外，白血病病患者在此之前的波动CD4+T支线粒形体意味著对闭环颇具抵抗性，展现出有为波动T支线粒形体的诱发减慢，自然导致的Treg和形体外导致的诱导Treg，以及免疫历程的CD4+T支线粒形体在此之前IL-2反理应减慢。本学拳法研究的目的是描绘出有了CD4+闭环性T支线粒形体(Treg)在群集极平稳方面者在此之前的特质，他们的中年人为43岁(31-72岁)，随访小时为18-32年。

法则：BOX学拳法研究是一项以人群为基础的交叉学拳法研究，在21岁表列胃癌的病患者子女在此之前检查1改进型白血病的危险心理因素。我们在此之前描绘出有了近十年平稳方面者的特质，他们持续保持多重口内自身突变HIV多达10年，但不能经常出有现白血病的药理学呕吐，慢性或非来进行性自身免疫。随后，10名此后持续保持无白血病并愿意提供大量肝脏抽取的平稳方面者纳入T和B支线粒形体功用系统性。在现今的学拳法研究在此之前，8名慢方面者(SP小组)，在此之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的口内自身突变HIV。所有的参与者都正处于1改进型白血病方面的1期，尽管一些人随后失掉了口内自身突变对某些免疫的HIV反理应，然而，一名病患者已经正处于2期数6年，但不能经常出有现药理学呕吐，一名病患者被诊断为白血病，该成年人72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性在此之前对该遗传物质来进行了实质上评估。分离外周血单个核支线粒形体(PBMCs)，采用多变量流式支线粒形体拳法和T支线粒形体诱发试验评估遗传物质在此之前Treg的增益、表改进型和功用。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)来进行无委派聚类系统性，评估Treg表改进型。

结果：与保健遗传物质相比之下，来自慢方面形体的遗忘CD4+T支线粒形体的委派聚类推测，作用于的遗忘CD4+ Treg增益增高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关肽(GITR)表达出有来增高有关。一名HbA1c升高的病患者与方面平稳者和归一化的印证小组相比之下，Treg谱有所不尽相同。功用系统性说明，与保健遗传物质相比之下，来自平稳方面形体的Treg内源性的CD4+波动T支线粒形体诱发明显损害。展现出有为对波动CD4+T支线粒形体CD25和CD134表达出有来的诱发增高。

由此可知1 熟悉的表改进型系统性推测，CD4+Treg亚改进型在慢方面队列在此之前增高。由FlowSOM生成的Treg会议室，聚集在来自所有遗传物质的活命CD4+CD45RA -支线粒形体上。根据记号物表达出有来鉴定出有10个元簇:遗忘T支线粒形体_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T支线粒形体;HLA-DR + GITR +遗忘T支线粒形体;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)常用9个不尽相同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个键值推选一个炮兵部队(100个炮兵部队)，较小的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在键值小组周围绘图。每个键值在此之前的饼由此可知问到单个记号的表达出有来级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以推测全面性记号表达出有来。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)生成由此可知，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起原子量为每个metacluster装支线由此可知(原子量> 0.05%)考虑到为HD和SP小组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T支线粒形体(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T支线粒形体(l)。深蓝色边框推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 常用CITRUS的预测模改进型表明，Treg增益的增高是方面平稳的红色。分级暂时性(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP参与者和归一化的HD参与者在CD4+CD45RA−T支线粒形体上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的推选性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出有来来进行分离，模拟器FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)小组以及遗传物质SP 606(深蓝色)在此之前CD25+ cd127的增益综合由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性偏序的装支线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)玉米簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出有来数值着色，箭头厚实的簇被标记为SP和HD队列密切关系的不尽相同。(j)装支线由此可知推测了在SP(虎纹)和HD(灰点)小组在此之前，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的比起原子量(人口比例)。(k)直方由此可知推测每个簇的表改进型(粉红色)和Treg记号比起表达出有来与背景表达出有来(蓝色);上列，内核Treg_3;下面几天后，内核Treg_4。背景与所有其他簇在此之前记号的表达出有来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验

由此可知3 与保健献血者相比之下，方面平稳者遗忘treg的GITR增高。每个遗忘CD4+T支线粒形体元簇(遗忘T支线粒形体_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T支线粒形体;HLA-DR + GITR +遗忘T支线粒形体;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个表达出有来记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表达出有来热由此可知(sp606不以外在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇在此之前所有HD(黄褐色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表达出有来串联，推测直方由此可知(c)和综合由此可知(d)。Wilcoxon配对标记秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有遗传物质以外，p< 0.05(蓝色)遗传物质SP 606和归一化的HD不以外在测试在此之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs在此之前GITR表达出有来，从分级暂时性，从所有HD(黄褐色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)串联，推测直方由此可知(e)和综合由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标记秩检验

由此可知4 来自平稳方面的CD4+ treg支线粒形体支配波动CD4+T支线粒形体的灵活命性减低。SP小组用蓝色的支线和边框问到，HD小组用红色的支线和边框问到，深蓝色的支线/边框问到遗传物质sp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T支线粒形体来进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被记号为CFSE, Treg按观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠活命化支线粒形体，培育出有3天后来进行流式支线粒形体拳法监测。(a-d)与CD4+接收者者比起理应的treg培育出有(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培育出有。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE诱发百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百分比。常用HIV印证(作用于的自发支线粒形体不含treg)计算诱发百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 波动CD4+T支线粒形体对平稳方面的T支线粒形体活命化的诱发更脆弱。SP小组用蓝色的支线和边框问到，HD小组用红色的支线和边框问到，深蓝色的支线/边框问到遗传物质sp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T支线粒形体来进行分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel记号，treg按观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠活命化支线粒形体，培育出有3天后来进行流式支线粒形体拳法(CD25反染)和支线粒形体因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同培育出有。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE诱发调升(b)。(c,d) CD25诱发调升(c)和CD134诱发调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出有在此之前的表达出有来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论据：我们得出有的论据是，来自平稳方面子的活命化遗忘CD4+Treg在GITR表达出有来在此之前受益了扩张和丰富，重申了进一步学拳法研究Treg在1改进型白血病几率母形体在此之前的表型的前提。

原意来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28