Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型肝炎患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次浮现家兔自身免疫到浮现1型高血压流行病学患儿的十分困难亲率在儿童初期就有很差的揭示，多个家兔自身免疫特征性的儿童里有70%在血液叠加后10在短期内患上高血压，而随访15年的儿童这一人口比例上升到84%。一般来说之下，占流行病学1型高血压一半以上的型1型高血压的发病功能还不能得到前提的研究工作。

越发多的人开始运用于分期系统来定义1型高血压的十分困难：生殖在浮现多种家兔自身免疫时带入第1过渡期，浮现低血糖精神状态时带入第2过渡期，浮现患儿时带入第3过渡期。一些多发家兔自身免疫特征性的生殖，在1期和2期，十分困难较很慢，并发展为发病的1型高血压。我们以前揭示了一第三组在首次测定到多种家兔自身免疫取样后多于10年无高血压的极很慢十分困难者，这第三组患儿人数不及，但有所不同之处非常明确。随后，我们推断出家兔自身免疫特异性CD8+T蛋白质质子化在十分困难快速的患儿里基本不存有，但在全面性发病和长时间存有的高血压患儿里很容易测定到。这可能表明，与十分困难患儿一般来说，这些患儿自身免疫质子化的闭环增强。

晚期研究工作表明，尽管闭环性T蛋白质(Treg)存量正常，但高血压患儿存有一些功能缺陷，其里以外对IL-2的质子化能力降低。此外，高血压患儿里的振荡CD4+T蛋白质可能对闭环更具抵抗性，显出为振荡T蛋白质的抑制作用减弱，自然消除的Treg和游离消除的游离Treg，以及免疫境遇的CD4+T蛋白质里IL-2质子化减弱。本研究工作的目的是揭示了CD4+闭环性T蛋白质(Treg)在一小群极快速十分困难者里的有所不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群基础上的纵向研究工作，在21岁以下确诊的患儿亲属里氘查1型高血压的危险因素。我们以前揭示了长时间快速十分困难者的有所不同之处，他们依然多重家兔自身免疫特征性超过10年，但不能浮现高血压的流行病学患儿，很慢性或非同步受累自身免疫。随后，10名继续依然无高血压并不想包括大量血液取样的快速十分困难者纳入T和B蛋白质功能归纳。在目前的研究工作里，8名很慢十分困难者(SP第三组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的家兔自身免疫特征性。所有的大多数人都处于1型高血压十分困难的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身免疫对某些免疫的特征性质子化，然而，一名患儿已经处于2期多于6年，但不能浮现流行病学患儿，一名患儿被诊断为高血压，该受试者72岁，在搜集实验取样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳里对该NADPH同步进行了直接归纳报告。剥离外周血单个氘蛋白质(PBMCs)，采用多模板流式蛋白质练成和T蛋白质抑制作用试验归纳报告NADPH里Treg的振幅、性状和功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类有系统研究、涉及联和回归)同步进行无督导聚类归纳，归纳报告Treg性状。

结果：与健康NADPH一般来说，来自很慢十分困难体的清醒CD4+T蛋白质的督导聚类表明，激活的清醒CD4+ Treg振幅上升，与糖皮质激素游离的TNFR涉及蛋白(GITR)暗示上升有关。一名HbA1c升温的患儿与十分困难快速者和给定的相尤其第三组一般来说，Treg谱有所区别。功能归纳表明，与健康NADPH一般来说，来自快速十分困难体的Treg介导的CD4+振荡T蛋白质抑制作用明显损害。显出为对振荡CD4+T蛋白质CD25和CD134暗示的抑制作用上升。

三幅1 有系统的性状归纳表明，CD4+Treg亚型在很慢十分困难路由表里上升。由FlowSOM转化成的Treg过道，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据记号物暗示有系统研究出10个元簇:清醒T蛋白质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T蛋白质;HLA-DR + GITR +清醒T蛋白质;内氘Treg_1;内氘Treg_2;内氘Treg_3;和内氘Treg_4。(a)运用于9个有所不同Treg记号转化成的10个元簇的MST。每个节点均是由一个战斗群(100个战斗群)，大得多的元战斗群(10个元战斗群)在节点第三组周围手绘。每个节点里的饼三幅回应单个记号的暗示级别。(b)每个元聚类的热三幅，以表明总体记号暗示。(c, d)为HD第三组(c)和SP第三组(d)转化成三幅，以及FlowSOM比对的每个元簇的较厚。(e-l)一般来说稀土元素为每个metacluster装终点站三幅(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP第三组:内氘Treg_2 (e),内氘Treg_3 (f),内氘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T蛋白质(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T蛋白质(l)。蓝色带子均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 运用于CITRUS的系统结构证实，Treg振幅的上升是十分困难快速的标识。分级门控(a - f)和柑橘归纳(g-k)尤其SP大多数人和给定的HD大多数人在CD4+CD45RA−T蛋白质上的歧异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的均是由性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示同步进行剥离，精心设计FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(布氏)第三组以及NADPHSP 606(蓝色)里CD25+ cd127的振幅概述三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的装终点站三幅;(c) HLA-DRloGITR−(内氘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内氘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内氘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内氘T cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，箭头突出的簇被比对为SP和HD路由表两者之间的有所不同。(j)装终点站三幅表明了在SP(布氏)和HD(灰点)第三组里，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的一般来说稀土元素(人口比例)。(k)直方三幅表明每个簇的性状(暗红色)和Treg记号一般来说暗示与背景暗示(暗红色);上列，内氘Treg_3;上面一行，内氘Treg_4。背景与所有其他簇里记号的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验证

三幅3 与健康献血者一般来说，十分困难快速者清醒treg的GITR上升。每个清醒CD4+T蛋白质元簇(清醒T蛋白质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T蛋白质;HLA-DR + GITR +清醒T蛋白质;内氘Treg_2;内氘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个暗示记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的暗示热三幅(sp606不以外在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(暗红色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR暗示串联，表明直方三幅(c)和概述三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和验证，p< 0.07(蓝色)所有NADPH以外，p< 0.05(暗红色)NADPHSP 606和给定的HD不以外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR暗示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(暗红色)和SP 606(蓝色)串联，表明直方三幅(e)和概述三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩验证

三幅4 来自快速十分困难的CD4+ treg蛋白质控制振荡CD4+T蛋白质的能力降低。SP第三组用暗红色的终点站和带子回应，HD第三组用黄色的终点站和带子回应，蓝色的终点站/带子回应NADPHsp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被记号为CFSE, Treg按辨别的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠重置蛋白质，培训3天后同步进行流式蛋白质练成测定。(a-d)与CD4+；也者一般来说应的treg培训(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用比亲率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用比亲率。运用于特征性相尤其(激活的自发蛋白质另有treg)量度抑制作用比亲率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

三幅5 振荡CD4+T蛋白质对快速十分困难的T蛋白质重置的抑制作用更极端。SP第三组用暗红色的终点站和带子回应，HD第三组用黄色的终点站和带子回应，蓝色的终点站/带子回应NADPHsp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel记号，treg按辨别的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠重置蛋白质，培训3天后同步进行流式蛋白质练成(CD25反染)和趋化因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用三份(b)。(c,d) CD25抑制作用三份(c)和CD134抑制作用三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

推论：我们得出的推论是，来自快速十分困难子的重置清醒CD4+Treg在GITR暗示里得到了引入和丰富，重申了更进一步研究工作Treg在1型高血压风险生殖里的表征的有效性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28